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新冠病毒抗原检测(胶体金法)--神奇的“红线”
发布日期:2022/12/19 13:33:13
病毒就像一颗包裹着橡皮糖夹心的什锦软糖。
“橡皮糖夹心”位于病毒体的中心,主要成分为核酸(ssRNA),为病毒的复制、遗传和变异提供遗传信息。外层的“软糖”是病毒体的蛋白质外壳,称“核衣壳”(N),可保护病毒核酸免受外界因素的破坏,并能介导病毒进入宿主细胞。而入口之前,“软糖”外包裹的一层“糖衣”便可以理解为病毒体的包膜,它是包绕在病毒核衣壳外面的双层膜。

新型冠状病毒的这层“糖衣”异常绚丽,其膜上有刺突糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。在这些结构蛋白中,N蛋白在不同SARS-CoV-2病毒株系中高度保守,且具有良好的免疫原性,为病毒侵染细胞后表达量最高的结构蛋白,是良好的检测生物标志物。目前,新型冠状病毒抗原检测一般以检测N蛋白为主。

假设这是一份存在新冠病毒特定抗原(N蛋白)的口咽/鼻咽拭子,经拭子处理液的释放洗脱后,N蛋白随着处理液被滴入样品孔。
待测样本在纸纤维所形成的毛细力拉动下,从试纸的一端流向另外一端。在此过程中,N蛋白将经历三道关卡。
备注:第一关卡:金标抗体(金标记2019-nCoV抗体);第二关卡:T线抗体(2019-nCoV抗体);第三关卡:C线抗体(“金标记2019-nCoV抗体”二抗)。

样本在毛细管作用下沿着检测卡加样孔端向前移动,如果样本中含有新型冠状病毒抗原,抗原将结合胶体金标记的新冠 N 蛋白抗体 MAb1,形成新冠病毒抗原-胶体金标记抗体复合物,复合物随样本继续迁移到硝酸纤维素膜上,被固定在硝酸纤维素膜上的另一个新冠 N 蛋白抗体 MAb2 抗体捕获,形成紫红色的检测线(T 线),显示新型冠状病毒抗原阳性;如果检测线(T 线)不显色,则表示新型冠状病毒抗原阴性。检测卡中还包含一条质控线 C 线,无论样本中是否含有相应的待测物,紫红色的质控线(C 线)都会出现,用于判读层析过程是否正常。
质控: 用于判断是否有足够样本,层析过程是否正常,金标新冠抗体随液体层析到质控区(C)时被羊抗鼠新冠抗体捕捉形成金标新冠抗体-抗新冠抗体复合物,在质控区(C)形成红色条带。

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